PD-1経路組換えタンパク質

ビオチン化PD-1経路タンパク質

ELISAは、タンパク質間相互作用を特徴づけるために使用されるアッセイ技術です。 化合物ライブラリの初期ハイスループットスクリーニング（HTS）でよく使用されます。 ACROBiosystemsは、様々なプレビオチン化PD-1経路タンパク質を開発しております。 ビオチン化タンパク質は、ELISAアッセイでの捕捉と検出の双方向の抗体として利用できます。さらに、通常の抗体より高い特異性と検出感度を示しています。

	説明	製品番号	種別	構造
Pair 1	Human PD-L1 / B7-H1 Protein, Fc Tag, low endotoxin	PD1-H5258
Pair 2	Mouse PD-L1 / B7-H1 Protein, Fc Tag	PD1-M5251
	Biotinylated Mouse PD-1 / PDCD1, Fc Tag, Avi Tag (AviTagTM)	PD1-M82F4
Pair 3	Human PD-1 / PDCD1 Protein, Fc Tag (HPLC-verified), low endotoxin	PD1-H5257
	Biotinylated Human PD-L1 / B7-H1, His Tag & Fc Tag, Avi Tag (AviTagTM)	PD1-H82F3
Pair 4	Mouse PD-1 / PDCD1 Protein, Fc Tag	PD1-M5259
	Biotinylated Mouse PD-L1 / B7-H1, Fc Tag, Avi Tag (AviTagTM)	PD1-M82F5

研究をサポートするために、弊社はPD-1 [ビオチン]：PD-L1阻害剤スクリーニングキット（製品番号EP-101）を開発しました。このアッセイでは、固定化したヒトPD-L1と自社開発のビオチン化PD-1タンパク質との結合を測定する、比色ELISAプラットフォームを使用しています。本製品は、PD-1とPD-L1阻害剤の迅速かつハイスループットなスクリーニングに適しています。

図2  2μg/mL（100μL/ウェル）の固定化PD-L1は、ストレプトアビジン-HRPで検出した場合、0.038〜0.6μg/mLの線形範囲でビオチン化ヒトPD-1に結合できます。

プロトコルを申請

図3  抗PD-1中和抗体によるPD-1-PD-L1結合の阻害は、PD-1 [ビオチン化]：PD-L1阻害剤スクリーニングELISAアッセイペア（製品番号EP-101）によって測定されます。

プロトコルを申請

ビオチン化タンパク質をフルオロフォアタグ付きSAと一緒に使用して、特定の表面マーカーを発現する細胞を検出/分離することができます。 「ANTI-PD-1抗体とその使用方法」という米国特許（米国特許20160159905）で、著者（ファイザー社）はACROBiosystemsのビオチン化PD-L1（製品番号PD1-H82F3）とビオチン化PD-L2（製品番号PD2-H82F6）を使用し、PD-1発現細胞に対する結合アッセイで候補抗体と競合します。 このアッセイによって、抗体の結合活性が測定されます。

バイオパニングは抗体開発のアプローチとして注目されています。 AviTag^TMビオチン化タンパク質はSAコーティングされた磁気ビーズ/表面でバイオパニングに使用できます。 コーティング密度が高く、抗原提示が均一であるため、ビオチン化されていないタンパク質や化学的にビオチン化されたタンパク質より優れていると考えられています。

Fcタグで、偽陽性になる可能性があるため、これらの実験には利用できません。 私たちは、Hisタグのみを使用するAviTagTMPD-1経路タンパク質を開発しました。 バイオパニング用にも特に適しています。

分子名	製品番号	種別	構造	純度	特長
PD-1	PD1-H82E4
PD-L1	PD1-H82E5
PD-L2	PD2-H82E8

セルベースアッセイで確認されたタンパク質

プロの製薬会社サプライヤーとして、弊社は標的タンパク質の活性を検証するためのセルベースアッセイプラットフォームを築き、薬物スクリーニングのために、セルベース試験のデータサポートを提供しております。

弊社では、自社で製造したヒトPD-1過剰発現293細胞を用いたフローサイトメトリーアッセイとセルベースELISAを行い、PD-L1（製品番号 PD1-H5258）とPD-L2（製品番号 PD2-H5251）がPD-1に結合することを確認しました。

図4  フローサイトメトリーアッセイで、組換えヒトPD-L1（製品番号PD1-H5258）がヒトPD-1を過剰発現している293細胞に結合できることが確認されました。PD-L1の濃度は10ug/mLです。

プロトコルを申請

図5  フローサイトメトリーアッセイで、組換えヒトPD-L2（製品番号PD2-H5251）がヒトPD-1を過剰発現している293細胞に結合できることが確認されました。 PD-L2の濃度は1ug/mLです。

プロトコルを申請

図7 固定化した細胞表面PD-1（5x10⁴個/ウェル）は、ヒト PD-L1, Fc Tag（製品番号PD1-H5258）とEC50 0.029 μg/mLで結合できます。                      

プロトコルを申請

図8 固定化した細胞表面のPD-1（5x104個/ウェル）は、ヒト PD-L2, Fc Tag（製品番号PD2-H5251）とEC50 0.018 μg/mLで結合できます。

プロトコルを申請

リファレンス

• Ishida Y., et al., 1992, EMBO J. 11 (11): 3887–95.

• Blank C., et al., 2007, Cancer Immunol. Immunother. 56 (5): 739–45.

• Agata Y., et al., 1996, Int. Immunol. 8 (5): 765–72.

• Freeman GJ., et al., 2000, J. Exp. Med. 192 (7): 1027–34.

• Latchman Y., et al., 2001, Nat. Immunol. 2 (3): 261–8.

• Yamazaki T., et al., 2002, J. Immunol. 169 (10): 5538–45.

• Dong H., et al., 1999, Nat. Med. 5:1365-1369.

• Freeman G.J., et al., 2000, J. Exp. Med. 192:1027-1034.

• Nishimura H., et al., 2001, Trends in Immunology 22:265.

• Tseng S.-Y., et al., 2001, J. Exp. Med. 193:839-846.

• Latchman Y., et al., 2001, Nat. Immunol. 2:261-268.

• He X.-H., et al., 2004, Acta Biochim. Biophys. Sin. 36:284-289.

関連情報

• Biotinylated CD3E & more CD3 products

• Targets of CAR-T Cell Therapy

• B-Cell Maturation Antigen

• TIGIT Signaling Axis

• Leukocyte Surface Antigen CD47

• Lymphocyte-activation gene 3 (LAG-3)

• Recombinant ROR1 & ROR2 Proteins